狗狗得冠状能吃药好吗？
犬冠状病毒病（Canine coronavirus，CCoV）是严重危害犬类健康的肠道传染病原， 感染后引起病毒性肠炎样疾病[1].该病主要经消化道感染，潜伏期3～8d (平均5 d)，发病率高、流行广且容易重复感染，对幼年和老龄易感动物的危害尤为严重 [2-4] 目前尚无治疗该病的特效药物，疫苗和驱虫是预防该病的重要措施之一[5，6] 在实际生产中，临床上常采用抗生素等药物治疗病毒感染症状，但疗效不佳，并且会存在药物残留及不良反应等问题，因此寻找一种安全有效的防治方法具有重要的现实意义.
中药具有毒副作用小、不易产生耐药性的特点，在临床上应用广泛[7，8]， 其主要通过影响病毒吸附、穿透细胞、脱壳和mRNA翻译等多个环节来阻止病毒的复制，从而起到抗病毒作用；此外还具有调节机体免疫功能的作用[9~11]. 本试验通过筛选出对CCoV感染犬具有显著保护作用的中药复方，为进一步研发防控本病的制剂提供实验依据
1材料与方法
1.1药品与试剂
人参（Panax ginseng C. A. Mey.）、黄芪（Astragalus memoriacens（Fisch.） Bge．）、黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）、甘草（Glycyrrhizauralensis Fisch．）购自陕西天智中药饮片有限公司，经陕西中医药大学药学院王超教授鉴定为人参、黄芪、黄芩、甘草. 连翘（Fructus forsythiae）、板蓝根（Radix Isatidis）、金银花（Flos lonicerae japonicae）、大青叶（Folium Isatidis）、鱼腥草（Herba Houttuyniae）均购自西安新龙药业有限责任公司，以上药材均为符合《中国药典》规定的合格中药材； 病毒稀释液[12]：磷酸缓冲液(PBS，0.1mol/L，pH=7.2)，含蔗糖10g/ L，蛋白酶抑制剂混合物（胰蛋白酶抑制剂、氨基肽酶、a-溶菌酶、胃蛋白酶抑制剂）10mg/mL． CCVDR-2株由西北农林科技大学动物医学院兽医传染免疫实验室保存并传代制备而成· 其他常用试剂均为分析纯或优级纯
1.2仪器
HH.S21－6电热恒温热水浴锅（江苏金坛市医疗器材厂的）;UV2550紫外分光光度计（日本岛津公司）;TU1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用有限公司） BENCHROLL全自动生物样品处理系统（德国BERNARD公司） SartoriusBS224S电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司的）：PCR仪（美国Applied Biosystems公司的）：Bio Rad GelDocXRS+凝胶成像系统（美国BioRad公司的）；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂的）；恒压灭菌锅（天津泰斯特仪器有限责任公司的）；微量进样器（上海精科生产的）；电泳槽和转膜槽（北京六一器械厂的）；超净工作台（苏州净化设备有限公司）等.
1.3 试验动物
健康成年杂种犬48只，雄性，2月龄，体质量10kg左右，由西安交通大学动物实验中心提供.基础饲料按常规配制，自由饮水，室温25℃±1℃，保持光照和黑暗规律交替，饲养条件良好
1.4病毒分离
取健康犬的粪便加生理盐水制成1：10的混悬液，然后取其1 mL接种于Vero细胞，待出现细胞浸润病变时收获，进行病毒复筛。将收集的病毒以PBS倍比稀释至不同的浓度，再分别取适量接种Vero细胞培养瓶内，每瓶0.1 mL，同时设空白对照和一个阳性对照（感染293细胞的CCoV强毒株DR‐2），37℃培养，观察细胞病变情况。当无细胞病变出现时，即为病毒阳性。
1.5单因素实验设计
利用SAS软件进行单因素方差分析和Dunnett’s t检验，得到影响中药有效组分的3个主要指标为总黄酮含量、黄芩苷和黄芩素总量以及黄连碱的含量，由此确定了3味中药的最佳配比.
具体方法如下所示：①总黄酮含量测定：准确称取上述中药提取物各0.5 g于10 mL容量瓶内，加入80%乙醇溶液使其完全溶解，配成浓度为0.5 mg/mL的药液，摇匀备用②黄芩苷和黄芩索总量的测定：取上述药液0.5 mL置于具塞试管中，加入50%硫酸溶液2 mL，混匀，放置1 h，加水稀释至刻度，静置10 min后用分光光度计测其在515 nm处的吸光值③黄连碱的测定：精密称取提取液适量，用氯仿定容到50μL，按照文献中的方法制备标准品溶液，并计算回归方程：Y＝0.2250 X − 0.0361，r 为0.9997，检测限为0.71 ng.
1.6 正交实验设计
根据单因素实验结果选定各中药的添加量范围分别为：人参2～3 g， 黄芪1.3～1.8 g，黄芩1.3～2 g ，甘草1.5~1.9 g ， 大黄0.3 ~0.5 g ： 小黄
0.3～0.5g：黄连0.3～0.5 g.考虑到所选药物的剂量大小会影响药效发挥的效果以及成本控制等因素的影响，故选用L9（34）的正交表安排试验，见表1.
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